如何選擇符合實(shí)驗(yàn)要求的核酸染料？
核酸染料是一種靈敏、穩(wěn)定和相對(duì)安全的熒光核酸染色試劑，是生物實(shí)驗(yàn)中*的一分子，尤其是在核酸檢測(cè)相關(guān)試驗(yàn)中，所以核酸染料對(duì)于分子生物學(xué)相關(guān)專業(yè)的學(xué)生來說并不陌生，該如何選擇適合自己使用的核酸染料呢？以下從幾個(gè)方面來說明：
1、安全性：如果選擇EB替代染料，那么染料的安全性就是一個(gè)非常重要的指標(biāo)。安全性評(píng)估主要的檢測(cè)有Ames測(cè)試、細(xì)胞滲透性實(shí)驗(yàn)、染色體畸變和正向突變分析、口服毒性分析等。在安全性方面，具有較多檢測(cè)項(xiàng)目和機(jī)構(gòu)出具檢測(cè)報(bào)告的核酸染料，安全性可能會(huì)更高；另外在一些報(bào)道或?qū)Ρ葦?shù)據(jù)中，我們也可根據(jù)它們可能的原料來判斷它們的安全性。
2、穩(wěn)定性：核酸染料的穩(wěn)定性和在各種條件下的染色效果，會(huì)直接影響觀察到的染色結(jié)果。
3、靈敏度：幾乎所有的EB替代染料都其染料的靈敏度至少不低于EB，甚至高于EB，具體到試驗(yàn)內(nèi)容上，只要不是有特殊的需求，一般都能滿足。
4、遷移率：由于核酸染料最終都會(huì)結(jié)合到DNA上，才能通過染料從而對(duì)DNA進(jìn)行分析，這也就意味著如果采用點(diǎn)染法或膠染法進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí)，根據(jù)使用的染料不同，核酸染料或多或少會(huì)對(duì)核酸的遷移率甚至帶型產(chǎn)生影響。
7-AAD，是一種核酸染料，與DNA結(jié)合后可發(fā)出強(qiáng)烈的熒光，其熒光特性與PI相似，可被488nm氬離子激光激發(fā)，但其發(fā)射光譜較PI窄，且發(fā)射波長(zhǎng)更長(zhǎng)，對(duì)其他檢測(cè)通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的*替代品，可與多種488激發(fā)光激發(fā)的熒光染料聯(lián)合使用，如FITC，PE等。
另外，7-AAD是一種非滲透性熒光染料。該染料不能透過活細(xì)胞的細(xì)胞膜，但可穿透膜損傷細(xì)胞如晚期凋亡細(xì)胞或者壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜并與其內(nèi)的DNA結(jié)合，可用來區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞，廣泛用于流式細(xì)胞儀。
